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Tesis:

Caracterización del sistema de regulación de la biosíntesis de un compuesto poliquétido en Streptomyces Antibióticus ATCC11891

  • Autor: COLOMBO RODRIGUEZ, María Victoria

  • Título: Caracterización del sistema de regulación de la biosíntesis de un compuesto poliquétido en Streptomyces Antibióticus ATCC11891

  • Fecha: 1997

  • Materia: CIENCIAS DE LA VIDA. Teseo;GENÉTICA. Teseo;INGENIERIA GENÉTICA. Teseo;MICROBIOLOGÍA. Teseo;METABOLISMO DE LAS BACTERIAS. Teseo

  • Escuela: E.T.S. DE INGENIEROS AGRONOMOS

  • Departamentos: BIOTECNOLOGIA

  • Acceso electrónico:

  • Director/a 1º: MALPARTIDA ROMERO, Francisco

  • Resumen: La regulación de la biosíntesis de metabolitos secundarios en Streptomyces esta determinada por una cascada de señales que tiene sus últimos pasos en genes específicos de la ruta biosintética. Dichos genes están físicamente localizados junto a los demás genes de la misma. En nuestro laboratorio se habían clonado y secuenciado un grupo de genes implicados en la biosíntesis de un compuesto poliquétido procedente de Streptomyces Antibióticus ATCC 11891. Entre los genes localizados aparecía una fase de lectura abierta (ORF0) altamente homóloga a reguladores de transcripción de la familia LysR. (Fernández Heredia, 1992). En este trabajo se estudian las características de la regulación de dicha ruta de biosíntesis. Cumpliendo las características propias de la familia LysR, el producto génico de ORF0 se une a su propio promotor, como se ha demostrado mediante ensayos de retardo en gel y "footprinting" con DNAsa I, utilizando proteína sobreexpresada en Escherichia coli, y purificada y renaturalizada a partir de cuerpos de inclusión. El papel de ORF0 en la regulación de la transcripción de los genes de la poliquétido sintetasa (PKS) a los que acompaña, se ha determinado en condiciones heterólogas, utilizando para ello Streptomyces coelicolor, productor del poliquétido pigmentado actinorrodina. Mediante estudios de complementación entre ambas rutas y protección a ribonucleasa S1 se ha determinado que ORF0 es necesaria pero no suficiente para la expresión de la PKS procedente de S. Antibióticus, en condiciones heterólogas. Esta expresión es dependiente a su vez del regulador de la biosíntesis de actinorrodina, ActII-ORF4. Por este motivo se procedió a la localización de genes reguladores procedentes de S. Antibióticus capaces de activar la producción de actinorrodina en Streptomyces lividans y en mutantes ActII-ORF4 de S. coelicolor. De este modo, se han clonado y secuenciado tres nuevos genes físicamente ligados al "cluster", uno de ellos altamente homologo a ActII-ORF4 y los otros dos homólogos a sistemas de regulación de dos componentes (sensor y regulador). Esta agrupación de genes de biosíntesis contiene por tanto tres tipos de reguladores de transcripción, dos de ellos pertenecientes a dos de las familias de reguladores mas extendidas en procariotas (familia LysR y familia de sistemas de reguladores de dos componentes) y un tercero homólogo a ActII-ORF4, que encabeza una familia de reguladores de transcripción de PKS en Streptomyces