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Tesis:

Caracterización de aislados españoles del virus de las manchas bronceadas del tomate y de sus RNAs defectivos interferentes

  • Autor: TRAD YUNES, Jumana

  • Título: Caracterización de aislados españoles del virus de las manchas bronceadas del tomate y de sus RNAs defectivos interferentes

  • Fecha: 1997

  • Materia: CIENCIAS AGRONÓMICAS. Teseo;FITOPATOLOGÍA AGRÍCOLA. Teseo;VIRUS DE LAS PLANTAS. Teseo

  • Escuela: E.T.S. DE INGENIEROS AGRONOMOS

  • Departamentos: BIOTECNOLOGIA

  • Acceso electrónico:

  • Director/a 1º: DIAZ RUIZ, José Ramón

  • Resumen: Se han caracterizado y comparado biológicamente dos aislados del virus de las manchas bronceadas del tomate (TSWV) que se encontraron infectando plantas de pimiento en las Islas Canarias (TSWV-C) y en la provincia de Almería (TSWV-AL), dos áreas geográficas distantes en España. Se ha desarrollado un procedimiento de purificación del virus que es simple, rápido y eficiente, ya que produce un alto rendimiento de preparaciones virales limpias, y se ha optimizado el método de purificar nucleocápsidas virales directamente de tejido infectado, habiéndose establecido la presencia de tres nucleocápsidas de diferentes tamaños. Se ha estudiado por microscopía electrónica la citopatología de las células de plantas infectadas, la cual ha revelado el sitio celular de la replicación del virus asociado con las estructuras del viroplasma y su complejo de material denso a los electrones y usando diferentes procedimientos de tinción negativa, se ha analizado la morfología y estructura de los viriones y las nucleocápsidas purificados, apareciendo las partículas virales con forma redondeada, de 80-100 nm de diámetro con su membrana claramente teñida y sus proyecciones en forma de espículas bien definidas. Las nucleocápsidas purificadas aparecieron como haces de material punteado teñidos densamente, asemejándose al material observado dentro de los viroplasmas. Se ha obtenido un antisuero frente a las proteínas de la partícula viral completa y otro frente a las nucleocápsidas. Se ha determinado que ambos aislados de TSWV pertenecen al serogrupo 1 de los Tospovirus. Se han analizado los RNAs virales encapsidados y las proteínas estructurales del virus en preparaciones purificadas, distinguiéndose tres bandas de RNA y tres principales proteínas estructurales, G1, G2 y N, además de una proteína de alto peso molecular, que por su tamaño pudiera ser la polimerasa viral. Se ha estudiado la generación de RNAs defectivos interferentes derivados del RNA L, en plantas de Nicotiana rústica. Solo el aislado TSWV-C ha sido capaz de generar dos RNAs defectivos distintos que presentan una casi coincidente deleción interna de alrededor del 70 por ciento del RNA L salvaje, del que retienen ambas regiones 5' y 3' no codificantes. Ambos RNAs defectivos mantienen una fase de lectura abierta y pueden codificar una proteína mas pequeña que la proteína viral, pero con los mismos extremos C y N terminales. Las regiones flanqueando los sitios de unión de la deleción presentaron dos diferentes secuencias cortas y repetidas, involucradas probablemente en su generación por un mecanismo de salto de la polimerasa