Tesis Doctorales UPM: Consulta online

Título: Purificación, clonación, expresión y propiedades inhibitorias de una cistatina de Castanea Sativa

Resumen: Se ha llevado a cabo la purificación y caracterización de un inhibidor de cisteín proteasas, CsC, de semilla de C. sativa. Se ha aislado su clon de cDNA a partir de una librería de semillas inmaduras de castaña. El inhibidor fue expresado en E. coli y purificado del extracto bacteriano. La identidad de la cistatina recombinante y la de semilla fue confirmada por análisis MALDI, electrofóresis bidimensional y las secuencias amino terminales. La CsC tiene una masa molecular de 11275 Da y un pI de 6.9. Su consecuencia de aminoácidos incluye tres motivos conservados esenciales para la actividad inhibitoria y muestra una identidad de secuencia significativa con otras fitocistatinas. La CsC recombinante inhibe papaína (Ki:29nM), ficina (Ki: 65 nM), quimopapaína (Ki: 366nM) y catepsina B (Ki: 473nM). Al contrario de la mayoría de las cistatinas también se detectó actividad inhibitoria frente a tripsina (Ki:3489 nM). Los patrones de expresión de CsC durante el desarrollo de la semilla fueron diferentes a los de otras cistatinas. La CsC es efectiva frente a extractos de distintos ácaros e insectos