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Tesis:

Transformación biobalística de cultivares Indica y Japónica de Oryza Sativa L.: Selección de higromicina y expresión estable del inhibidor de tripsina BTI-CMe (Cen-Itr1)

  • Autor: ALFONSO RUBI, Julio

  • Título: Transformación biobalística de cultivares Indica y Japónica de Oryza Sativa L.: Selección de higromicina y expresión estable del inhibidor de tripsina BTI-CMe (Cen-Itr1)

  • Fecha: 1999

  • Materia: Sin materia definida

  • Escuela: E.T.S. DE INGENIEROS AGRONOMOS

  • Departamentos: BIOTECNOLOGIA

  • Acceso electrónico:

  • Director/a 1º: DIAZ RODRIGUEZ, Isabel

  • Resumen: El arroz (Oryza sativa L) es uno de los cultivos más importantes del mundo. Se estima que cada año esta especie reduce en un 50 por ciento su rendimiento máximo teórico debido a plagas y enfermedades. La finalidad de esta tesis ha sido transferir, integrar y expresar el gen Itr1 de cebada, que codifica el inhibidor de tripsina BTI-CMe, a células desdiferenciadas (callos) de cultivares Indica y Japónica de arroz y regenerar plantas completas, de arroz a partir de células transformadas. Se han establecido sistemas de propagación in vitro de plantas de arroz mediante embriogénesis somática, y se han optimizado las condiciones de transferencia de genes mediante bombardeo de partículas. Se han diseñado construcciones génicas que portan el gen Itr1 y genes selectivos que permiten únicamente el crecimiento de las células transformadas en medios selectivos. Utilizando como molde ADN de arroz y como cebadores nucleótidos deducidos de la secuencia del gen Itr1 de cebada, se ha amplificado mediante la técnica de PCR un fragmento de ADN del tamaño esperado, pero no se ha detectado la correspondiente proteína en ninguno de los tejidos de arroz no-transgénico analizados (semillas y hojas). Las plantas transformadas seleccionadas han sido analizadas molecular y bioquímicamente. Se han obtenido doce plantas transgénicas de arroz, siete de la línea IR58 de tipo Indica y cinco del cultivar Senia tipo Japónica, que portaban el transgén y expresaban la correspondiente proteína. Ensayos in vitro de inhibición de tripsina han demostrado la funcionalidad de la proteína BTI-CMe en los arroces trasngénicos. Futuros bioensayos con insectos determinarán la capacidad insecticida de dichas plantas