Tesis:
Interacción huésped-patógeno, movimiento y aplicaciones biotecnológicas de los RNAs defectivos del virus del moteado del haba (BBMV).
- Autor: SANDOVAL BRIONES, Claudio
- Título: Interacción huésped-patógeno, movimiento y aplicaciones biotecnológicas de los RNAs defectivos del virus del moteado del haba (BBMV).
- Fecha: 2002
- Materia: Sin materia definida
- Escuela: E.T.S. DE INGENIEROS AGRONOMOS
- Departamentos: BIOTECNOLOGIA
- Acceso electrónico:
- Director/a 1º: ROMERO CANO, Javier
- Resumen: Las moléculas defectivas y defectivos interferentes han sido materia de estudio durante los últimos años, cuyo objetivo ha sido establecer los mecanismos de formación y el papel que estas partículas tienen en el control de la replicación viral. En este sentido, ha sido importante no sólo analizar las interacciones y relaciones existentes entre estas moléculas, virus auxiliar y la planta huésped donde se replican, sino también el efecto de factores externos que pueden influir en la generación de estas. En esta Tesis se han estudiado factores externos que en la formación y acumulación de los D-RNAs del virus del moteado del haba (BBMV), virus del mosaico del bromo (BMV) y virus del moteado clorótico de la carilla (CCMV). Adicionalmente y con el fin de tener una mejor comprensión de la capacidad de infección y movimiento de las moléculas defectivas interferentes (DI-RNAs) del BBMV se ha utilizado el gen de la proteína verde fluorescente de la medusa (GFP) como gen delator. El cDNA de este gen, fue introducido reemplazando parte del cDNA genómico de la molécula defectiva interferente del BBMV. Finalmente se evaluó la capacidad de los RNAs defectivos de este virus para actuar como vectores en la expresión de proteínas. Los resultados obtenidos muestran que el tamaño de los DI-RNAs de BBMV formados, está íntimamente ligado, al huésped y las condiciones ambientales en las que se desarrollan las plantas, Por otra parte los D-RNAs del BBMV y BMV no sólo se formaron y acumularon luego de sucesivos pases en alta multiplicidad de inocuo, sino también tras periodos prolongados de incubación en sus plantas huéspedes. Como factor externo, la temperatura afecta la formación de las moléculas defectivas. Temperaturas bajas favorecieron la formación y acumulación de los DI-RNAs de BBMV y los D-RNAs de BMV.CCMV no generó moléculas defectivas en carilla o Nicotiniana benthamiana tras sucesivos, pases de un inóculo luego de periodos prolongados de infección. BBMV tuvo un claro efecto sobre el rendimiento con niveles de reducción en productividad que variaron entre un 75 por ciento y un 36 por ciento dependiendo de la fecha de inoculación. La presencia de partículas defectivas junto con el virus, conllevaron a una reducción adicional de un 25 por ciento en la producción de semilla. El gen de la GFP se expresó en niveles, detectables. al ser clonado, en la DI-Mo71. La expresión del gen delator varió entre haba y guisante. En guisante, la expresión se mantuvo localizada en células del parénquima no observándose fluorescencia a nivel del floema, En haba, la fluorescencia se presentó de modo más uniforme, si bien en un comienzo, se expresó en los bordes y ápices de la hoja. Aquí se observó expresión del gen delator en el floema. En guisante, cv. Lincoln el defectivo quimérico conteniendo, el gen delator, solo se expresó en las hojas inoculadas Esta variedad fue capaz de generar, encapsidar y acumular el DI-RNA conteniendo la GFP en un segundo pase a partir de hojas inoculadas, Los resultados de hibridación de impresión de tejidos de hojas superiores de haba, muestran que la DI conteniendo la GFP y el virus auxiliar, no se distribuyen de forma similar. El defectivo modificado tiende a acumularse en los bordes de la hoja mientras que el RNA2 del BBMV se distribuye de forma más uniforme. ri. La DI-quimérica se mantuvo hasta el séptimo pase. Las plantas infectadas con BBMV y la DI modificada con el gen de la GFP mostraron expresión de ésta incluso hasta 3 meses luego de la inoculación. De acuerdo a estos resultados, los DI-RNAs del BBMV presentan un claro potencial como vector de expresión génica de proteínas foráneas.