Tesis:
Estudios sobre variación somaclonal en cultivos in vitro de Chysanthemum morifolium.
- Autor: UBERHUAGA CANDIA, Elisabeth Carola
- Título: Estudios sobre variación somaclonal en cultivos in vitro de Chysanthemum morifolium.
- Fecha: 2002
- Materia: Sin materia definida
- Escuela: E.T.S. DE INGENIEROS AGRONOMOS
- Departamentos: BIOLOGIA VEGETAL
- Acceso electrónico:
- Director/a 1º: MARTIN FERNANDEZ, María del Carmen
- Director/a 2º: PEREZ RUIZ, César
- Resumen: El cultivo del crisantemo (Dendranthema grandiflora Syn. Chrysanthemum morifolium) es uno de los más importantes en floricultura, propagándose vegetativamente, incluyendo técnicas de cultivo de tejidos. El presente trabajo persigue adquirir un mejor conocimiento de los procesos implicados en la aparición de variación somaclonal y de los factores que parecen afectar a la naturaleza y frecuencia de la inestabilidad in vitro. Se caracterizaron genéticamente mediante RAPDs y mediante estudio morfológico quince cultivares de crisantemo. La introducción del material en cultivo in vitro se realizó mediante cultivo de meristemos caulinares. Los cultivos de ocho de las variedades caracterizadas se sometieron, en distintos momentos del proceso, a condiciones de estrés añadidas (aumento de la temperatura habitual de cultivo, reducción de la concentración de sales en el medio, restricciones a la ventilación de los recipientes, etc.). La técnica RAPDs ha revelado una elevada diversidad entre las variedades con un nivel de similitud siempre menor del 80 por ciento. El análisis morfométrico de las hojas de crisantemo reveló diferencias estadísticamente significativas entre variedades. La respuesta de las distintas variedades al cultivo in vitro, en porcentaje de meristemos elongados, número de brotes y en el desarrollo en posteriores fases de proliferación, mostró una clara influencia del genotipo. Las modificaciones ensayadas a las condiciones estándar de cultivo in vitro evidenciaron distintos resultados en función del tratamiento y del tiempo en cultivo según variedades. La variación ocurrida en distintos momentos del cultivo in vitro de crisantemo, mostró un amplio rango de frecuencias variación (0-79,5 por ciento), respondiendo principalmente al efecto del genotipo. El tratamiento de Reducción de sales tuvo, con el tiempo, un mayor efecto inductor de variación. Se ha encontrado una homología del 66,1 por ciento entre uno de los grupos de bandas hipervariables con secuencias del retrotransposón Tnt-1 de tabaco, flanqueada por dos colas relacionadas con LTRs de un retrotransposón de Arabidopsis. Esto confirma que la actividad de los retroelementos estaría implicada en la ocurrencia de la variación somaclonal de algunos cultivares de crisantemo. La presencia de zonas asociadas al retrotransposón en algunas de las plantas madre de crisantemo y la homología de sus secuencias con bandas que aparecen nuevas en otras variedades tras el cultivo in vitro, parece indicar que la retrotransposición puede ser un mecanismo natural de variación en crisantemo y que podría ser responsable de alguna de las características que definirían las distintas variedades. Los patrones de hibridación Southern-blot con la sonda de secuencia homóloga a la zona de la transcriptasa inversa del retrotransposón Tnt-1, evidenciaron zonas de homología en distintas muestras de los patrones y en plantas regenerantes, sin corresponderse en todos los casos al patrón de bandas RAPDs. La amplia diferencia en el contenido de ADN nuclear (5,39-9,38 pg) entre las variedades estudiadas, algunas de ellas con el mismo número cromosómico, podrían deberse a diferencias en la cantidad de ADN repetitivo, a la presencia de elementos móviles o a posibles diferencias en el tamaño de los cromosomas. Las variaciones de ADN nuclear en las plantas provenientes de cultivo in vitro respondieron al genotipo. La evidencia de células somáticas con diferente cantidad de ADN en un mismo individuo evidencia la presencia de regenerantes quiméricos.