Tesis:
Producción, purificación y caracterización bioquímica de las amilasa extracelular e intracelular de Streptococcus bovis.
- Autor: TINOCO MARTINEZ, Juan Gabriel
- Título: Producción, purificación y caracterización bioquímica de las amilasa extracelular e intracelular de Streptococcus bovis.
- Fecha: 2003
- Materia: Sin materia definida
- Escuela: E.T.S. DE INGENIEROS AGRONOMOS
- Departamentos: TECNOLOGIA DE ALIMENTOS
- Acceso electrónico:
- Director/a 1º: ENAMORADO SOLANES, Rafael
- Resumen: El pozol (de náhuatl pozolli, que quiere decir espumoso), es una bebida refrescante que se elabora a partir de masa de maíz nixtamalizado. Para el consumo se prepara en agua y es fermentada de manera espontánea aproximadamente 72 horas, del pozol se han aislado bacterias lácticas, levaduras y mohos y son las bacterias lácticas las que le dan las características organolépticas a la bebida, para beberla se adiciona de sal, azúcar, miel de abeja o chile secos y molidos esta bebida es principalmente consumida por diversos grupos indígenas y mestizos de los estados del sureste de México: Tabasco, Chiapas, Campeche, Yucatán y Oaxaca En este trabajo se identificó mediante la técnica de secuenciación del fragmento 16S del ADNr el género y especie de la cepa amilolítica aislada de una muestra de pozol de Villahermosa, Tabasco, México, así mismo se produjo, purificó y caracterizó bioquímicamente las amilasas extracelular e intracelular de la cepa identificada como Streptococcus bovis. La amilasa extracelular se induce en presencia de maltosa como única fuente de carbono, y se observó mayor producción cuando el microorganismo se incubó a baja concentración de oxigeno, ph 7.0 y a una temperatura de 37 grados, y el peso molecular estimado de la enzima purificada mediante cromatografía de afinidad se calculó en geles SDS-PAGE y fue de 69,500 Da. La enzima purificada muestra un ph óptimo de actividad de 7.5 es estable en un rango de ph que va de 6.0 a 8.5, la temperatura óptima de actividad fue de 50 grados centígrados, estable en un rango de temperatura de 40 a 60 grados centígrados. La actividad enzimática se inhibe en presencia de Hg 2+ y se ve favorecida en presencia de Ca 2+ y Mg2+ además presenta un punto isoeléctrico de 5.0, una típica cinética de Michaelis-Menten de primer orden con una V.max =0.05679 u mol/ml min y una Km = 3.5058 mgl/ml. El patrón de hidrólisis de la amilasa extracelular dió como principal producto glucosa seguida de maltosa y maltotriosa en menor cantidad. La amilasa extracelular de Streptococcus bovis se relaciona con una endo amilasa y por sus características podemos decir que se trata de una alfa-amilasa termoestable y alcalifílica. La amilasa intracelular se induce en presencia de almidón como única fuente de carbono, presentando una mayor producción cuando se incubó a un ph de 7.5, una temperatura de 37 grados centígrados y baja concentración de oxigeno el peso molecular estimado de la enzima purificada mediante cromatografía de afinidad se calculó en geles SDS-PAGE y fue de 44, 500 Da, la enzima purificada muestra un ph óptimo de actividad de 8.0 , estable en un rango de ph entre 7.0 y 8.5, La temperatura óptima de actividad fue de 55 'C. y es estable en un rango de temperatura de 40 a 65 grados centígrados. La actividad. enzimática se inhibe en presencia de Hg2+ y se ve favorecida en presencia de Ca 2+ y Mg 2+ , presenta un punto isoeléctrico de 5.5, presenta una típica cinética de Michaelis-Menten de primer orden con una V.max = 0.03751 umol/ml min y una Km = 1.6697 mg/ml . El patrón de hidrólisis de la amilasa intracelular da como principal producto maltotriosa seguida de maltosa y glucosa en menor cantidad. Por sus características podemos decir que la amilasa intracelular de Streptococcus bovis es una alfa-amilasa productora de maltotriosa, termoestable y alcalifílica.