Tesis:
Análisis de las interacciones de la proteína CI del virus de la sharka con proteínas de la planta
- Autor: JIMENEZ TORRES, Ignacio
- Título: Análisis de las interacciones de la proteína CI del virus de la sharka con proteínas de la planta
- Fecha: 2004
- Materia: Sin materia definida
- Escuela: E.T.S. DE INGENIEROS AGRONOMOS
- Departamentos: BIOTECNOLOGIA
- Acceso electrónico:
- Director/a 1º: GARCIA ALVAREZ, Juan Antonio
- Resumen: Los potyvirus son virus de RNA de polaridad positiva cuyo genoma codifica una poliproteína que se procesa autocatalíticamente para dar lugar al menos nueve proteínas maduras. Una característica de las infecciones del potyvirus es la acumulación de inclusiones citoplasmáticas en forma de ruedas de molino, también llamadas inclusiones cilíndricas. Estas inclusiones están formadas por la proteína CI. Esta proteína está implicada en la replicación y en el movimiento de célula a célula del virus, En estudios previos, se realizó un escrutinio mediante el método de los dos híbridos de una genoteca de cDNA de Nicotiana behthamiana utilizando la proteína CI del virus de la sharka (PPV) como cebo. Se identificaron dos proteínas L1y L2) que interaccionaban específicamente con la proteína CI de PPV.L 1 es una proteína desconocida con un dominio de dedos de zinc de tipo HIT y L2 es el precursor de la subunidad PSI-K del fotosistema I. Con objeto de caracterizar dichas interacciones, se ha empleado el sistema de los dos híbridos para analizarlos dominios implicados y la especificidad. Se ha comprobado que es necesario un fragmento que comprende los 409 aminoácidos N-terminales de la proteína CI para que la interacción tenga lugar, Las interacciones también se han detectado con otro protovirus (TVMV)y las proteínas L 1 y L2 de otra planta (Arabidopsis thaliana);sugiriendo que dichas interacciones son un evento genera! en las infecciones por potyvirus. Para determinar la importancia biológica de las interacciones se ha analizado la infección de PPV en plantas de N. benthamiana con la expresión de L 1 y L2 reducida mediante el silenciamiento de su RNA. Cuando el gen del L1 es silenciado la acumulación del virus es más baja que en plantas control sugiriendo que la proteína L 1 puede tener un papel positivo para la infección de PPV. Sin embargo cuando el gen de L2 es silenciado, observó una mayor acumulación de PPV. Se utilizó también un mutante nulo de la proteína L2 (PSI-K) de A. Thaliana asegurando así la ausencia total de la proteína, Los resultados fueron similares a los obtenidos mediante el silenciamiento, sugiriendo que esta proteína interfiere con al infección de PPV, posiblemente a través de su interacción con la proteína CI. Además se han identificado dos proteínas más de N benthamiana que interaccionan con la proteína CI, así como tres proteínas de Arabidopsis pero la importancia de estas interacciones está aún por determinar.