Tesis:
Especificidad de la interacción con el huésped del virus del mosaico de la colza (ORMV) mediante el estudio de genes virales y vegetales implicados.
- Autor: MANSILLA MANSILLA, María del Carmen
- Título: Especificidad de la interacción con el huésped del virus del mosaico de la colza (ORMV) mediante el estudio de genes virales y vegetales implicados.
- Fecha: 2006
- Materia: Sin materia definida
- Escuela: E.T.S. DE INGENIEROS AGRONOMOS
- Departamentos: BIOTECNOLOGIA
- Acceso electrónico:
- Director/a 1º: PONZ ASCASO, Fernando
- Resumen: Los virus vegetales son parásitos intracelulares obligados que requieren de la planta para llevar a cabo su ciclo replicativo. En la presente tesis se estudia la interacción planta/virus tanto desde su componente viral, como del huésped. El sistema utilizado se basa en la interacción entre el virus del mosaico de la colza (ORMV) con algunos de sus huéspedes. Los aspectos estudiados fueron: el estudio de determinantes de patogenicidad en el genoma viral; los efectos de la proteína de movimiento viral (PM) expresada en plantas transgénicas de Arabidopsis thaliana; la búsqueda de factores del huésped implicados en el desarrollo de la infección viral, usando para ello un sistema basado en las plantas transgénicas previamente caracterizadas y, finalmente, el estudio de la capacidad de un vector viral basado en ORMV para silenciar transgenes en A. thaliana. En cuanto al estudio de determinantes de patogenicidad, se localizó un determinante asociado al síntoma de punteado necrótico sistémico producido por ORMV en la infección de Nicotiana tabacum cv. Samsun, en el dominio polimerasa (54k) del gen viral que codifica para la replicasa. Éste es el primer determinante de patogenicidad localizado en el dominio 54k en un tobamovirus. En las líneas de Arabidopsis thaliana transgénicas para el gen que codifica para la PM de ORMV, la caracterización gen ética demostró que la línea TG.MP(+).7 presentaba el transgén en homocigosis e insertado en un único locus situado en la región terminal del brazo derecho del cromosoma 1. La caracterización fenotípica de esta línea mostró que se facilitaba el movimiento de un trazador fioemático en la planta, de forma selectiva hacia algunos órganos florales; mientras que no se observaron alteraciones en el reparto de biomasa o en la disponibilidad de azúcares. Dichas plantas fueron susceptibles a la infección por ORMV, aunque con síntomas atenuados. Para la búsqueda de factores del huésped implicados en el desarrollo de la infección viral se desarrolló un sistema experimental específico basado en ORMV?PM+GFP y la línea TG.MP(+).7. ORMV?PM+GFP es un virus quimérico defectivo en PM y que expresa la proteína fluorescente GFP, carece de la capacidad de moverse de la célula inicialmente infectada y puede ser complementado en trans proporcionando PM funcional mediante coinoculación de ORMV o mediante transgénesis (plantas TG.MP(+).7). El sistema experimental se basó en revertir mediante mutagénesis la complementación del virus defectivo por la planta transgénica, pudiendo determinar este fenotipo mediante la observación de GFP. Se obtuvieron y caracterizaron varios mutantes de las plantas transgénicas con ausencia de complementación sistémica, denominados dotcom ("don't transgenically complement ORMV?PM movement"), abreviada mente dcm. El alelo mutante dcm-1, asociado a un fenotipo inicial de células fiuorescentes individuales en la hoja inoculada con ORMV?PM+GFP, se mapeó en el cromosoma 4. El estudio de la capacidad de ORMV?PM+GFP para silenciar transgenes en A. thaliana demostró que podía inducir VIGS en plantas transgénicas para GFP. La eficacia de dicho silenciamiento resultó dependiente de la dosis génica del transgén.