Tesis:
Papel de la motilidad en la patogénesis de Dickeya dadantii 3937.
- Autor: ANTUNEZ LAMAS, María
- Título: Papel de la motilidad en la patogénesis de Dickeya dadantii 3937.
- Fecha: 2008
- Materia: Sin materia definida
- Escuela: E.T.S. DE INGENIEROS AGRONOMOS
- Departamentos: BIOTECNOLOGIA
- Acceso electrónico:
- Director/a 1º: RODRIGUEZ PALENZUELA,Pablo
- Resumen: Dickeya dadantii 3937 (ex- Erwinia chysanthemi 3937), perteneciente a la familia Enterobacteriaceae, es una bacteria fitopatógena que produce las denominadas podredumbres blandas en un amplio rango de huéspedes con importancia económica. Un patógeno eficaz debe entrar al interior de una planta para poder producir enfermedad. Para estudiar el papel de la motilidad y de la quimiotaxis en el patogenicidad de Dickeya dadantii 3937, se seleccionaron y mutaron varios genes implicados en la cadena de transducción de señales de quimiotaxis (cheB, cheW, cheY y cheZ) y un gen perteneciente al motor flagelar (motA). Todas las cepas mutantes generadas crecieron de forma similar a la cepa silvestre tanto en medio rico como en medio mínimo además de no presentar alteraciones en la producción y secreción de enzimas pectolíticas. Estas cepas mutantes mostraron una reducción significativa en su capacidad de movimiento en placa con respecto a la cepa silvestre: motA (94%), cheY (80%), cheW (74%), cheB (54%) y cheZ (48%). La virulencia de las cepas mutantes afectadas en quimiotaxis fue analizada en los huéspedes endibia, violeta africana, patata y Arabidopsis thaliana. Todos los mutantes mostraron una reducción significativa en su virulencia en algunos huéspedes, sin embargo, el grado de disminución varió dependiendo de cada tipo de ensayo de virulencia. La capacidad de penetrar al interior de una hoja de A. thaliana estaba fuertemente afectada en todos los mutantes, mientras que la capacidad de colonizar los tubérculos de patata sólo mostró una disminución significativa en dos de los mutantes (motA y cheY). En general, la virulencia de los mutantes podría ser jerarquizada como motA < cheY < cheB =cheW < cheZ, lo que se correlaciona con el grado de afección en su capacidad de hacer swimming en placa. Estos resultados sugieren que la motilidad juega un papel importante en la patogenicidad de esta bacteria. En ensayos de quimiotaxis en placa y en cámara de Palleroni realizados con la cepa silvestre de D. dadantii 3937 se observó una quimiotaxis positiva hacia la mayoría de los-azúcares probados ácidos orgánicos aminoácidos y compuesto de origen vegetal como la acetosiringona y el ácido jasmónico. Estos datos sugieren que la bacteria es capaz de detectar estímulos exógenos. Además, el tratamiento de células de D. dadantii 3937 con ácido jasmónico 1mM hizo a la bacteria más virulenta en endibia y en violeta africana, lo cual sugiere una adaptación de la bacteria en respuesta a este estímulo. Para estudiar en más detalle como afectaba el pretratamiento de células de D. dadantii con ácido jasmónico 1mM, se realizó un análisis transcriptómico comparativo entre células tratadas y no tratadas. El resultado fue la inducción de una serie de genes relacionados con la defensa de la bacteria, como enzimas pectolíticas, bombas de extrusión de compuestos tóxicos (MDRs) y reguladores globales implicados en patogénesis. Todos estos resultados fueron comprobados mediante PCR cuantitativa. Además se obtuvo la inducción de una proteína aceptora de metilo o MCP implicada en la percepción del ambiente. El mutante en dicha MCP (17665) no perdió la capacidad de percibir el ácido jasmónico por lo que podemos afirmar que dicha MCP no es la única responsable de la percepción de este compuesto. Hemos estudiado el movimiento de D. dadantii 3937 en la superficie de hojas de endibia. Estos estudios muestran que cuando la hoja presenta una herida, la bacteria es capaz de moverse dirigiéndose a la misma. Los resultados obtenidos sugieren que D. dadantii 3937 es capaz de detectar y responder a estímulos de la planta provenientes de la herida.