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Tesis:

Caracterización molecular de genes (hupIJKhypABFCD) necesarios para la síntesis de hidrogenasa en Rhizobium leguminosarum bv viciae: hypB codifica para una proteína de unión a níquel

  • Autor: REY NAVARRO, Luis

  • Título: Caracterización molecular de genes (hupIJKhypABFCD) necesarios para la síntesis de hidrogenasa en Rhizobium leguminosarum bv viciae: hypB codifica para una proteína de unión a níquel

  • Fecha: 1994

  • Materia: GENÉTICA VEGETAL;LEGUMINOSAS;RHIZOBIUM

  • Escuela: E.T.S. DE INGENIEROS AGRONOMOS

  • Departamentos: BIOTECNOLOGIA

  • Acceso electrónico:

  • Director/a 1º: RUIZ ARGUESO, Tomás

  • Resumen: Durante la fijación simbiótica de N2 en nódulos de leguminosas se genera H2 como subproducto obligado de la actividad nitrogenasa. Algunas cepas de Rhizobium y Bradyrhizobium poseen un sistema hidrogenasa que oxida el H2 generado en los nódulos y aumenta la eficiencia del proceso de fijación de N2. La hidrogenasa de estas cepas es una proteína heterodimérica que contiene Ni y grupos Fe-S. En esta tesis se han estudiado la organización y funciones de los determinantes genéticos de la oxidación de Hz (genes hup) en Rhizobium leguminosarum. Mediante secuenciación de un fragmento de ADN de 7,8 kb, análisis de la secuencia y caracterización fenotípica de mutantes con inserciones Tn5, se identificó una agrupación de ocho genes, designados hupIJKhypABFCD, necesarios para la síntesis de una hidrogenasa activa. El producto del gen hupI es una rubredoxina y el de hupK probablemente una proteína de "andamiaje". Las proteínas HypABFD contienen motivos, CxxC, de unión a metales y están probablemente implicadas en la incorporación de Ni a la hidrogenasa. La proteína HypB posee múltiples histidinas contiguas en el extremo N terminal y fue purificada a partir de su sobre expresión en células de E. coli por cromatografía de afinidad por Ni. Mediante ensayos de diálisis de equilibrio se demostró que HypB se une en solución a 4 iones Ni2+ por monómero de HypB con una KD de 2,5 uM. Utilizando anticuerpos contra HypB purificada se demostró la síntesis de HypB en células microaeróbicas de R. leguminosarum y en bacteroides de guisantes. Se propone que la proteína HypB une Ni intracelularmente y está implicada en su transferencia a la apoenzima durante el proceso de síntesis de la hidrogenasa