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Tesis:

Caracterización y clonaje molecular (cDNA) de una familia multigénica que codifica proteínas de endospermo de cereales.

  • Autor: PAZ ARES RODRIGUEZ, Francisco Javier

  • Título: Caracterización y clonaje molecular (cDNA) de una familia multigénica que codifica proteínas de endospermo de cereales.

  • Fecha: 1984

  • Materia: Sin materia definida

  • Escuela: E.T.S. DE INGENIEROS AGRONOMOS

  • Departamentos: SIN DEPARTAMENTO DEFINIDO

  • Acceso electrónico:

  • Director/a 1º: GARCIA OLMEDO, Francisco

  • Resumen: Las proteínas CM son un grupo de polipéptidos de bajo peso molecular, ricas en cisteina, presentes en el endospermo de las gramíneas, que se caracterizan porque son extraídos con mezclas cloroformo-metanol (2:1 v/v). Los análisis inmunoquímicos analizados en esta tesis indican que se trata de un grupo de polipéptidos altamente relacionados entre si, codificados por una familia multigénica. Los experimentos sobre la síntesis "in vivo" e "in vitro" y localización subcelular en endospermo de cebada indican que las proteínas CM se sintetizan por los polisomas ligados a membrana como precursores, de mayor peso molecular (13.000-21.000 d) que las proteínas maduras (11.000-16.000), que se procesan contraduccionalmente y, finalmente, se exportan al citosol. Esta ruta de síntesis, procesamiento y deposición, que tiene lugar, preferentemente, entre los días 10 y 30 despues de la antesis (máximo entre los días 15 y 20), difiere de las hasta ahora descritas para otras proteínas de endospermo de cebada. Se ha construido una biblioteca de cDNA de endospermo de cebada de 20 días de desarrollo en la bacteria E. coli utilizando pBR322 como vector. Se han identificado tres clones representantes de la familia multigénica a la que pertenecen las proteínas CM (pUP-13, pUP-24 y pUP-38). Esta identificación se realizó según los siguientes criterios: i) hibridación preferencial con una sonda radiactiva obtenida a partir de una fracción de mRNA enriquecida en el correspondiente a las proteínas CM; ii) movilidad electroforética y contenido en cisteina del polipéptido sintetizado "in vitro" por el RNA mensajero seleccionado por el cDNA de los clones, y iii) reconocimiento de dicho polipéptido por los anticuerpos contra las proteínas CM de cebada. Se han secuenciado los cDNA representados en los clones pUP-13 y pUP-38 que seleccionaban RNA correspondiente a polipéptidos de distinto peso molecular, 17.000 y 19.000 d, respectivamente, demostrándose así que ambos clones corresponden a proteínas de la misma familia que las proteínas CM